腫瘍学分野

　腫瘍学分野

①ビクニン治療／②がん転移抑制治療／③子宮内膜症に関する研究／④絨毛性腫瘍に関する研究／⑤悪性腫瘍の転移とその制御に関する研究／⑥悪性腫瘍の診断と治療法の改善　

　１.　ビクニン治療　　　

ビクニン(Bikunin, UTI [Urinary Trypsin Inhibitor])：臨床応用可能な癌転移抑制物質

１．はじめに

ビクニンは尿由来のトリプシンインヒビターとして生理活性を有する糖蛋白質であり、従来よりurinary trypsin inhibitor (UTI)といわれてきた物質と同一である。ヒト羊水や尿中に存在するフリービクニンにはプロテアーゼ抑制活性以外の生物作用があることや、ビクニンを短鎖とするインター－α－トリプシンインヒビター(ITI)ファミリーの長鎖にも新規の生物活性が発見され、この分野における研究が加速度的に発展してきた。今回は「ビクニン(Bikunin, UTI)：臨床応用可能な癌転移抑制物質」と題してビクニンに焦点をあわせて最新の知見をまとめてみた。なお、ビクニンの由来はBis Kunitz Inhibitorの頭文字をとってBikuninと命名されたものである。

２．インター－α－トリプシンインヒビター(ITI)ファミリー

ITIファミリー分子は血清中のトリプシンインヒビター活性を有するプロテアーゼインヒビターである（図1）。ITIはビクニンに２本の長鎖（約80 kDa）が結合しており、プレ－α－トリプシンインヒビター(PαI)はビクニンに１本の長鎖が結合している。ITIでもPαIでも、また、ビクニン単独でもトリプシンインヒビター活性を有するため、このプロテアーゼインヒビター活性はビクニンに存在することがわかる。ビクニンは、コアタンパク質の10番目のセリン残基にO－グリコシド結合したコンドロイチン４-硫酸鎖が結合している^１）（図2）。

ITIファミリー分子は肝臓で合成され、循環血中に分泌される。その濃度は0.5 mg/mlに達する。肝細胞内ではほとんどすべてがITIファミリー(ITIとPαI)として合成され、フリーのビクニンとして分泌されることは少ない。すなわち、血中の主役はITIファミリーである。一方、尿中やヒト羊水中にはフリーのビクニンが多くを占める。ビクニンは、尿中へ排泄されたITIファミリー分子の代謝物と考えられるが、最近の研究により尿路結石患者の尿中ビクニンは健常人に比べて高値を示す^2,3）ため、炎症反応により腎臓の尿細管で積極的にビクニンを合成している可能性もある。

１）　ITIとヒアルロン酸(HA)との結合

血中濃度が高いにもかかわらずITIファミリー分子のインヒビター活性は非常に弱いため、ITIの本来の生理活性がプロテアーゼインヒビターであるとは考えにくい⁴⁾。最近、ITIファミリー分子の長鎖がヒアルロン酸(HA)に特異的に結合することが知られるようになった。HAはβ1,4-グルクロン酸－β1,3－N－アセチルグルコサミンの２糖の繰り返しからなる直鎖状のグリコサミノグリカンである。この長鎖とHAからなる複合体は癌細胞、顆粒膜細胞⁵⁾、線維芽細胞などの培養液中や、血清中にも存在する。HA単独では細胞外マトリックスへの保持作用は弱いため、長鎖がHAへ結合することにより細胞外マトリックスの安定化に寄与するものと考えられる⁶⁾。HAは結合タンパク質やプロテオグリカンと相互作用を持ち、細胞外マトリックスの主成分としてHAが機能を果たすためにはITIファミリー分子と結合して細胞外マトリックスとしてネットワークを形成する必要があることが分かってきた。癌の細胞外マトリックスや排卵時期の顆粒膜細胞の卵丘膨張⁷⁾も長鎖とHAからなる複合体により形成されている。

２）　排卵との関連

上述したように、ITIファミリー分子は培養線維芽細胞や中皮細胞の細胞外マトリックス中に分泌したHAを細胞外マトリックス内に引き留めるのに必要である。同様に卵巣から排卵するためにもITIとHAは必要である。それはin vitroで膨張が誘導された卵丘細胞膜においてHAリッチマトリックスが形成されるために必須の物質である⁷⁾。ちょうど排卵の時期には血管透過性が亢進して血中のITIが卵胞内へ積極的に流入してくる。顆粒膜細胞から産生されたHAとITIが細胞膜上で共有結合することによりHAリッチマトリックスが形成されるのである。

一方、ビクニンノックアウトマウスを作成すると雌は排卵障害を起こして不妊症になる。これはビクニンをノックアウトすることにより長鎖は存在するもののITI分子が形成されず、結果としてHAリッチマトリックスが形成されないことによる。したがって、肝細胞内ではビクニンの存在がITIファミリー分子の律速物質になっていると考えられる。ビクニンが直接排卵に影響するわけではなさそうである⁸⁾。しかし、ビクニンノックアウトマウスの卵巣をcDNAマイクロアレイにより比較検討すると、ビクニンノックアウトすることにより数々の遺伝子発現が変化することも確認してある（未発表データ）。

排卵現象を生化学的に表現すると以下のようになる。HAリッチマトリックスの形成はヒトを含む哺乳動物の排卵と受精が成功するため必須である。卵母細胞は、密着した卵丘細胞(cumulus cells)により囲まれ、コンパクトな丘細胞―卵母細胞複合体(COC)を形成している。血清ゴナドトロピンサージにより血清中のITIが血液―卵胞バリアーを通過し卵胞へ透過してくる。その後、丘細胞によるHAの合成と広範な細胞外マトリックスへの活発な組み込み(COC expansion)が起こり、卵胞壁からCOCが剥離する。この膨張したCOCは卵胞壁の破裂により排卵し、輸卵管へ移送されるが、顆粒膜細胞は卵巣に留まり、黄体細胞へ分化する。したがって、排卵するためにはCOC expansionが必須の条件である^9,10,11)。

３． ビクニン

1）　ビクニンの生理活性

それではビクニン自身の生理活性は何であろうか？ビクニンはトリプシン、プラスミン、好中球エラスターゼに対するプロテアーゼインヒビターであることは既知の事実である。前述したように、ビクニンはヒト羊水や尿中に豊富に存在している。羊水のビクニンは胎児尿由来であると考えられる。稀な先天奇形ではあるが、先天的に胎児腎臓が欠損したポッター症候群という疾患がある。胎児腎臓がないため、羊水の産生が充分得られず、胎児は妊娠中期に早産してしまう。先ほどの排卵現象と同様に陣痛発来および早産は生理的および病的炎症反応によって起こる。したがって、ビクニンにはこれらの過剰な炎症反応を抑制する作用があることが推定される。事実、切迫早産（まさに早産しやすい状態を言う）妊婦に経膣的にビクニンを投与することにより早産を回避することができるようになった。これは現在、ビクニン膣坐薬として臨床応用されている。つまりポッター症候群では羊水中にビクニンが存在しないため生理的・病的炎症反応を抑制できず、陣痛が発来していまい早産に至ってしまうというわけである。

　さらに、我々の長年の研究により羊水・尿中のビクニンが癌細胞の浸潤・転移を抑制する能力のあることを見出している。図３にボイデンチャンバーを用いたin vitroにおける癌浸潤を評価する系で観察するとビクニン添加したときに癌細胞の浸潤が抑制されるのがわかる。次に、ビクニン分子のどの部位が癌浸潤抑制活性を持つのか検討した。以下の４分子ITI、ビクニン、脱糖鎖ビクニン（コンドロイチン4-硫酸除去ビクニン）およびHI-8（プロテアーゼインヒビター活性を有するC末端のクニッツドメイン）の活性を比較した（図４）。トリプシン抑制活性に代表されるプロテアーゼインヒビター活性抑制は4分子すべてにおいて同様に認められた。一方、in vitro浸潤抑制能はビクニンにのみ認められ、他の3分子にはその活性は非常に弱い。したがって、癌浸潤抑制活性はプロテアーゼインヒビター活性抑制作用とは異なることが示された。

　それぞれの分子を¹²⁵Iで標識して癌細胞に添加するとビクニンが最もよく結合し、次に脱糖鎖ビクニンが弱く結合した。しかし、ITIやHI-8には癌細胞への結合能は認められなかった。ビクニン親和性カラムを作成しこれに結合する物質を癌細胞から抽出したところ、分子量40 kDaと45 kDaの2つの物質が得られた。このうち40 kDaの物質はHAに結合しているリンク蛋白質(Link Protein; Crtl1)とアミノ酸が一致した。リンク蛋白質にはビクニンのN末端のクニッツドメインが特異的に結合した（図2）。また、45 kDaの物質のアミノ酸配列および分子構造は未同定であるが、この物質にはビクニン分子のうちコンドロイチン4-硫酸が特異的に結合することが判明している（図2のビクニン受容体）。したがって、癌細胞には分子量40 kDaと45 kDaのビクニン結合蛋白質およびビクニン受容体が存在し、ビクニンはコンドロイチン4-硫酸とN末端のクニッツドメインを介して癌細胞表面に結合することが想定される（図５）^12,13,14,15)。つまり、癌細胞表面でビクニン―ビクニン受容体―LPの3量体がけ異性されることになる。この3量体はさらにLPがHAに結合することによりビクニン受容体がCD44に近づきやすくなり、ビクニン受容体―CD44複合体が形成されることになる。この結果、growth factors等の刺激に対してCD44のダイマー形成が阻止されるため、CD44を介するシグナル伝達が止まることになる。しかし、この実験は細胞外マトリックスを豊富に産生する軟骨由来の癌細胞を用いた実験であり、普遍性については今後検討する必要がある。最近、我々はヒト卵巣癌細胞において、これと同じ現象でビクニンがtransforming growth factor-beta (TGF-b) receptorのカップリング阻止を起こすことを見出した。現在までにビクニンによりダイマー形成が抑制されてシグナル伝達が阻止されるのはCD44とTGF-beta receptorだけである。
　ビクニンが癌細胞に結合するとどのような現象が観察されるかというと、まず、細胞内カルシウム流入が止まり、おそらくその結果として、MAP kinase (MEK, ERK)のリン酸化が抑制され（図６）、細胞の種類によってはPI3Kの活性化も抑制され、Aktのリン酸化が抑制された。ビクニンはMAP kinaseやAktのリン酸化を直接阻害しないため、これらのカスケードの上流を抑制してシグナル伝達を阻止していることが推定された^{16,17,18,19,20,21,22)}。そこで、ビクニンを添加した癌細胞とビクニン遺伝子を導入した癌細胞を用いてこれらの癌細胞にどのような変化が起こっているのかcDNAマイクロアレイを用いて検討した²³⁾。その結果、予想以上の多くの遺伝子（30～40個）が変化していることが判明した。代表的な候補遺伝子としてウロキナーゼ・ウロキナーゼ受容体・マトリプターゼ・PAPP-A (pregnancy-associated plasma protein-A)・PI3K p85.などがビクニンの下流に存在していた。これらはいずれも過去に癌細胞の浸潤・転移に関連した遺伝子群であった。現在、これらの遺伝子のアンチセンスを導入しビクニン作用を模倣することができるかどうか確認しているところである²⁴⁾。ビクニン添加によるウロキナーゼmRNAおよび蛋白質の産生抑制効果を図７に示した。ビクニン1 mMによりその作用が発揮されるのがわかる。

　以上をまとめると、ビクニンの生理活性として、①プロテアーゼインヒビターとしての作用、②CD44やTGF-beta receptorのダイマー形成阻止によるシグナル伝達抑制、③カルシウム流入抑制によるMAPK, PI3Kの活性化抑制、④ビクニン関連遺伝子の発現抑制、があり、いずれも癌転移にとっては抑制的に作用するとこが推定されている。

２） ビクニンによる癌転移抑制：動物モデル

ビクニンがマウスを用いた癌転移をin vivo実験系で抑制することができるかどうか検討した。まず、マウス肺癌細胞であるルイス肺癌細胞3LLを皮下に移植し4週間後に犠牲死させる動物モデルを用いた。この系では2週間後には肺への微小転移をすでに起こすことが分かっている^{25,26,27,28,29,30,31,32,33)}。皮下に3LLを移植すると同時に7日間、0.5 mg/日のビクニンをマウス腹腔内に投与すると有意に肺転移を抑制された。しかし、皮下に3LLを移植し7日間放置してからその後7日間、0.5 mgのビクニンをマウス腹腔内に投与しても肺転移は抑制されなかった。したがって、ビクニンは癌を移植すると同時に早期に使用しないと肺転移を制御することができなかった。そこで、早期癌モデルとして皮下に3LLを移植して7日目に手術により皮下移植巣を完全に切除した系を作成した。手術のみでもほとんど肺転移は抑制されたが、ビクニンを併用することにより有意に肺転移は抑制された。同時に抗癌剤であるエトポシドを使用するとほとんどすべてのマウスは肺転移を認めず治癒した。次に進行癌モデルとして皮下に3LLを移植して14日目に手術により皮下移植巣を完全に切除した実験モデルを作成した。手術のみではほとんど肺転移は抑制されなかったが、ビクニンを併用することにより有意に肺転移は抑制された。同時に抗癌剤であるエトポシドを使用すると肺転移数は極端に少なくなり生存するマウスも認めた。しかし、ビクニン自身には抗腫瘍活性、即ち腫瘍を縮小させる作用は認められなかった。

　2番目の実験として、ヒト卵巣癌細胞HRAをヌードマウスに腹腔内投与すると9～10日目に癌性腹膜炎を併発して死亡する動物実験モデルを用いた。HRAはビクニン遺伝子を持っていないのでこの癌細胞にビクニン遺伝子を導入することにより癌細胞の性格がどのように変化するのか検討した¹⁹⁾。コントロールベクターを導入したHRAとビクニン遺伝子を導入したHRA細胞を同様に腹腔内に投与すると、コントロールマウスは9～10日目に癌性腹膜炎を併発して死亡したが、ビクニン遺伝子を導入したHRA細胞を移植したマウスは4～5日遅れて癌性腹膜炎を併発した。移植後9日目に比較すると、ビクニン遺伝子を導入した場合には血性腹水が認められず、腹膜播種もほとんどみられなかった。横隔膜下への癌転移部の組織をみるとビクニン遺伝子を導入した細胞には横隔膜の筋層への浸潤が観察されなかった（図８）。いずれのマウスにおいてもビクニン投与による副作用は観察されなかった。横隔膜下への卵巣癌播種をH&E染色した結果を図９に示す。ビクニン遺伝子導入癌細胞の浸潤はコントロールと比較して非常に軽微であった。

３） ビクニンによる癌転移抑制：卵巣癌患者

以上の実験的結果を踏まえて、ヒト卵巣癌患者において通常治療時にビクニンを使用した群と未使用群における生存期間への影響を検討した（図10）。対象は主にIII期の上皮性卵巣癌患者で治療は卵巣癌根治手術後にCAP (Cyclophosphamide, adriamycin, cisplatin)療法かTJ (Paclitaxel, carboplatin)療法を6コース行なった。ビクニン併用群はビクニン30～90万単位を抗癌剤と共に連続7日間点滴静注したところ、ビクニン使用群で有意にoverall survivalが延長した。今後はより悪性度の高い膵癌、肺癌、大腸癌等についても臨床治験を行なって生きたいと考えている。

４）ビクニンの位置づけ：他の癌転移抑制物質との比較

既存の抗悪性腫瘍薬の作用機序は，基本的にいずれも腫瘍細胞に対して直接殺癌細胞効果(cytotoxic effect)として働くものである。しかし，サリドマイド(thalidomide)が，その催奇形性の原因追及から全く新しい概念のもとに腫瘍に対する抗腫瘍効果が浮かび上がってきた．この新しい考え方の特徴は薬効標的を癌細胞にするのでなく血管新生(angiogenesis)を阻害することにある．すなわち，血管内皮細胞に対する細胞分裂抑制作用(cytostatic effect)により血管新生が抑制され，痛細胞増殖に必要な酸素や栄養供給を遮断し，癌細胞の発達を防ぎ，また転移を抑制するものである．したがって，殺細胞効果を有しないため抗癌剤特有の種々の重篤な副作用も持ち合わせず，また耐性も生じないため理想的な薬物と期待されている．血管新生の調節は，プロテアーゼ活性，血管内皮の活性，線維芽細胞の活性，免疫応答やCXCケモカイン謝節などが複雑に絡んでいる。以下、詳細はインターネット³⁴⁾ を参照していただきい。

一例を上げると，プロテアーゼ活性調節は線維芽細胞成長因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）として，新生を促進するmatrix metalloproteinase (MMP)やそれを抑制するtissue inhibitor of MMP (TlMP)があり，腫瘍細胞では正のMMPが増える．その他，新生促進因子としてはvascular endothelial growth factor (VEGF)，thymidine phosphory1ase (TP)，urokinase-type plasminogen activator (uPA),アンジオポイエチン，インターロイキン-8，エリスロポイエチンなどがあり，負の調節因子としては，アンジオスタチン(angiostatin)，エンドスタチン(endostatin)，TGF-β，maspin，インターロイキン-1，-12，-10などがある．

現在、治験進行中の血管新生抑制薬は18種類ほどある．MMPを阻害するものは，Marimastat (British Biotech社，米国，非小細胞肺癌，小細胞肺癌，乳癌，前立腺癌，食道癌に対してPhase III)，AG3340(Agouron社，米国，非小細胞肺・癌，ホルモン抵抗性前立腺癌に対しPhase III，神経芽細胞腫に対しPhase II)，COL-3 (Collagenex社，米国，各種固形癌に対しPhase I)，Neovastat (Aeterna社，カナダ，非小細胞肺癌などに対しPhase III)，BMS-275291 (Bristo1-Myers社，米国，Phase I)があり，内皮細胞を直接抑制するものとしては，TNP-470 (TAP Phafmaceuticals社，米国，成人の固形進行癌に対しPhase II，リンパ腫ならびに急性白血病に対しPhase I: fumagillin類似合成物質で内皮細胞成長抑制作用を有する)，サリドマイド（Celgene社，米国，カポジ肉腫や各種癌，特に骨髄腫に対しPhase II，非小細胞肺癌ならびに非転移前立腺癌に対しPhase III: 作用機序不明），squalamine (Magainin Pharmaceuticals社，米国，小細胞肺癌，卵巣癌に対しPhase I，各種進行癌に対しPhase I：ツノザメ肝臓からの抽出物でNa-H交換NHE3を抑制)，combretastatin A-4 Prodrug(Oxigene社，米国，固形癌に対しPhase II，エンドスタチン ; Entre Med社，固形癌に対しPhase II)，血管新生活性因子を抑制するものは，SU5416 (Sugen社，米国，カポジ肉腫，神経膠腫，各種進行癌に対しPhase II，von-Hippe1Lindau病に対しPhase II，転移結腸直腸癌に対しPhase III: :VEGF受容体シグナリングの抑制)，SU6668 (Stgen社，米国，各種進行癌に対しPhase I: VEGF，FGFならびにPDGF受容体シグナリングの抑制)，インターフェロンα(PhaseII/III: bFGFならびにVEGF産生抑制)，anti-VEGFantibody (National Cancer lnstitute，米国，耐性固形癌に対しPhase I，転移腎細胞癌に対しPhase lI)，内皮細胞特異的integrinを抑制するものは，EMD121974 (Merk KCgaA社，ドイツ，進行あるいは転移癌に対しPhase I:内皮細胞表面に発現するintegrinの抑制薬)，その他の作用機構あるいは機序不明のものは，CAI(National Cancer lnstitute，米国，固形癌のコンビネーション治療に対しPhase I,卵巣癌ならびに進行腎細胞癌に対しPhase II: Ca2+流入抑制)，インターロイキン-12 (Cenetics Institute，米国，カポジ肉腫に対しPhase I/II，IM862 (Cytran社，米国，卵巣癌に対しPhase I，カポジ肉腫に対しPhase III: 機序不明)などである．

ビクニンは細胞外マトリックスを破壊する酵素を阻害するだけではなく、癌細胞が浸潤・転移するために必要なシグナル伝達を遮断する薬剤であり、全く新しい概念の薬剤として位置づけられる。

４．今後の計画

ビクニンの効果増強を目指した改変体の作成およびビクニン作用を模倣した内服可能な低分子物質の作成を行い患者のコンプライアンスを高め、癌転移抑制剤の改良を行なうことにより長期投与可能な薬剤の設計・試作を行っていきたい。近い将来，癌と共存しながらQOLを高める新しい機序の薬物が登場するかもしれない。

文献

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図表

右下がビクニンの立体構造である。

HI-8はC末端のKunitz domainに相当する。

図５　ビクニン受容体とリンク蛋白を介したビクニンの結合

①がヒアルロン酸(HA)に結合したLink protein (LP)であり、Kunitz-domain Iに結合する。また、②はビクニン受容体でコンドロイチン4硫酸と特異的に結合する。ビクニンが①と②の両者に結合すると②を介したシグナル伝達がウロキナーゼ産生を抑制し、癌浸潤・転移を抑制する。

図６　ビクニンによるMAP kinase のリン酸化抑制

図７　ビクニンによるウロキナーゼmRNA 産生抑制

ビクニン1 mMによりcalphostin CやH-7と遜色ないウロキナーゼmRNA 産生抑制作用がある。

図８　ビクニン遺伝子導入実験：横隔膜下転移

図９　ビクニン遺伝子導入実験：横隔膜下転移(H&E染色)

ビクニン遺伝子導入細胞は横隔膜の筋肉の中に浸潤できない。

図１０　ビクニン併用進行卵巣癌成績

ビクニン投与群に予後改善が確認できた。

　２.　がん転移抑制治療　　　

概要

１　がん治療の実情

２　がん治療の最新情報

３　がん転移のメカニズム

４　新規がん転移抑制物質ビクニンの発見

５　がん転移抑制剤ビクニンの優位性

６　ビクニン治療の問題点

１　がん治療の実情

わが国では1981年以降がんが死因の一位を占め続けており，がん撲滅が人類にとっての最大の課題となっております。現在、がん全体の治癒率は50%であり、進行がんでは固形腫瘍の治癒率は現在でもわずか10％しかありません。がん治療の原則は、手術によりできるだけ切除し残存腫瘍を放射線や抗がん剤で叩くことですが、最近の集学的治療をもってしても生存率は上昇していません。がん患者が死亡するのはがんが実質臓器に転移するからであり、がん転移を抑制することができればがん患者、特に進行がん患者の予後は飛躍的に向上します。｢転移を制するもの、がんを制す｣と言われるゆえんです。日本人のがんの罹患率は男性３６万人、女性２４万人で死亡数が男性１７万人、女性１１万人とすると最低でも約３０万人ががん転移抑制剤の使用対象患者になります。また、がんと共存を図るためにはがん転移抑制剤を長期間使用し続ける必要があります。

２　がん治療の最新情報

現在のがん治療においては、早期診断と治療法の進歩による治癒率向上の反面、がん転移に対する効果的な治療法はまだなく、がんの転移抑制は大きな課題となっています。最近では、「Tumor Dormancy (がん休眠)」という概念が定着しています。従来のがん治療とは異なった新しい戦略を考えるという視点で、がんと共存しながら長期生存を得る治療概念であることを考え合わせると、今後より広く普及されることが期待できると思われます。欧米ではがん細胞の増殖・転移能を支配するシグナル伝達を阻止する薬剤や血管新生抑制剤を使用してがん組織を秤量攻めにして増殖・転移を抑制しようとする概念が定着しつつあり、ある種の成長因子のシグナル伝達を遮断する薬剤も臨床応用されています。また、サリドマイドなど一部の薬剤では臨床治験が開始されある種のがんにはよい成績が得られております。しかし、前者では肺の間質性肺炎等による死亡や副作用も報告されており、決して副作用のない安全な薬剤であるとはいえないのです。

３　がん転移のメカニズム

近年の積極的な研究により、がん細胞の転移に関する分子生物学なメカニズムの解明がなされ、がん細胞が正常組織に浸潤するためには、様々なプロテアーゼ（蛋白質分解酵素のこと）の作用が必要であることが明らかになってきました。セリンプロテアーゼ(serine protease)の一種であるウロキナーゼ(urokinase-type plasminogen activator: uPAと略す)は細胞のがん化に伴って増加するプロテアーゼとして早くから注目され、がん転移と最も関連する蛋白質の一つと考えられています。このため、がん細胞膜上のuPAの働きを阻害することにより、がん細胞の転移を抑制する研究が試みられてきた経緯があります。さらに、最近ではがん細胞周囲や間質・結合織の細胞外マトリックスを破壊するための重要なそして強力なプロテアーゼとしてマトリックスメタロプロテイナーゼ(MMPと略す)に代表される酵素群が発見され、いちやく、桧舞台に登場してきました。この酵素活性を阻害することができればがん転移抑制御も夢ではない、と信じ多くの科学者や企業がこの事業に参入してきました。これらの研究が数年続き、全世界の人間が期待を込めて臨床治験の成り行きを見守ってきましたが、残念ながら、これらの薬剤のメリットは期待されたほどの成果を得ることはできませんでした。ウロキナーゼやマトリックスメタロプロテイナーゼを阻害すると、マウスを用いた動物実験ではほとんどの場合がん転移が抑制されます。しかし、ヒトのがん場合にはなぜ成功しないのでしょうか？

がんが浸潤・転移する場合は、がん細胞が局所で増殖し、正常細胞・組織など宿主の細胞や結合織に接着し、これらのバリアーをウロキナーゼやマトリックスメタロプロテイナーゼといったもので酵素学的に破壊し、細胞が移動する（浸潤）必要があります。しかし、酵素活性が強すぎたり長時間作用すると、がん浸潤の次のステップとしてのさらなる接着・移動が十分できなくなり、逆に浸潤しにくくなってしまいます。そこでがん細胞は巧妙な仕組みでウロキナーゼやマトリックスメタロプロテイナーゼの阻害物質(PAIやTIMPと言われているもの)を産生し過剰な組織破壊を自ら防止しているのでしょう。したがって、PAIやTIMPによりウロキナーゼやマトリックスメタロプロテイナーゼを単純に中和・抑制することががん転移抑制の治療にはなりません。ヒトの臨床検体を用いた検討でも、悪性度が高く転移しやすい患者ほど、がん組織中のウロキナーゼのみならずPAIも同時に高値を示すことが知られております。もし、がんの浸潤・転移がウロキナーゼとPAIのバランスで規定されているとすれば、PAIが高ければウロキナーゼを抑制するため、細胞外マトリックスの破壊が抑制されて、結果として浸潤・転移は抑制され、予後良好となるのではないかと考えられますが、事実と仮説は逆の結果が得られています。したがって、がん転移の治療の根幹にかかわる問題を我々はクリアーしていないのである。おそらく、がん細胞は浸潤・移動しようとするときはウロキナーゼを多く発現し、接着しようとするときはPAIが多く分泌されるのではないでしょうか。我々の医学はこの瞬間に変化する分子生物学的神業をいまだに解明することができないのです。

次に考えられることは、実際の臨床におけるがん組織はheterogeneity（がん細胞それぞれの性格が異なること）の構成集団よりなっているが、我々が動物実験で使用するがん細胞はcell lineとして非常に純粋であるため、薬の治療効果が出やすいのではないかとも考えられます。したがって、ヒトの場合はウロキナーゼやマトリックスメタロプロテイナーゼなど一つの作用点のみを抑制しても長期にわたってがん転移を抑制し続けることは困難であろうと思われます。

しかし、最近の分子生物学的実験手法や遺伝子学的手法によって、転移しやすいがん細胞とそうでないがん細胞とを徐々に区別できるようになりつつあります。がん細胞が浸潤・転移するためには内因性および外因性に影響を及ぼしている各種成長因子が必要です。これらの因子ががん細胞に作用するとがん細胞は細胞内にシグナルを伝達して浸潤・転移を活発に行なうようになります。ちょうど、怪我をしたときの組織修復と似たようなメカニズムで細胞が移動したり増殖したりするのです。しかし、怪我の場合は傷が治れば細胞の移動や増殖は終了しますが、がん細胞の場合は宿主が死を迎えるまで転移し続けるのです。

これらのシグナルを完全にとめることができればおそらくがん細胞の転移も一時的には抑制できると思います。しかし、ある一部の成長因子などの非常に限られたシグナル伝達に関与する部位を阻害する薬剤を開発しても、長時間この薬剤に暴露されていると、がん細胞が遺伝子を自ら変異させ、これらの薬剤から逃れる方法をあみ出してしまうでしょう。あるいはこの経路を使わない別の経路でがん転移を獲得してしまうでしょう。将来、さらにその経路を阻止する薬剤の開発を人類は考案することになるでしょうが、いたちごっこです。しかも、これらの物質には毒性があることも忘れてはいけません。

４　新規がん転移抑制物質ビクニンの発見

我々、浜松医大婦人科腫瘍チームは昭和60年より基礎研究および臨床研究を続け、卵巣がんの生理的転移抑制物質としてヒト羊水・尿中からビクニンという物質を発見しました。この物質を注射することによりin vitro（基礎実験）, in vivo（動物実験）において、ヒト卵巣がん細胞を移植した動物実験によりがんの転移を抑制することに成功しました。最終的にこの薬剤をヒト卵巣がん患者に使用した結果、長期生存することも臨床治験により証明することができました。ヒト卵巣がん患者にビクニンを注射剤として投与して有意に5年生存率を改善させることに成功しております。

さらに、ヒト羊水・尿から発見した生理的がん転移抑制物質（ビクニン）には毒性のないことが最大のメリットです。基礎実験・臨床研究の結果はビクニンによりウロキナーゼだけではなくPAIも遺伝子レベルでその発現が強力に阻止することを確認しています。

５　がん転移抑制剤ビクニンの優位性

現在、全世界の研究所および企業ががん転移抑制剤を含む新規抗腫瘍剤の開発にしのぎを削っており、多くのベンチャー企業が設立されております。我々が発見したがん転移抑制剤としてのビクニンは、１）ヒト羊水・尿より精製する技術はすでに確立されており、すでに商品化されていること、２）ビクニン投与により卵巣がん患者の予後を改善することはすでに臨床治験で確認されており、これを応用して全がん種に臨床応用することは困難ではないこと、３）ビクニンには毒性がないこと、がメリットであり、他に類似した報告は現在のところみられておりません。

６　ビクニン治療の問題点

ビクニンはヒト尿から精製したものであり、現在は注射剤として臨床応用されています。しかし、未承認薬のため保険適応はありません。また、注射剤であるため、連日患者に静脈注射しなければならないという不便があります。入院患者には適しているかもしれませんが外来通院で実施しようとすると患者様およびご家族に負担がかかり、問題が生じる可能性があります。そのため現在、ビクニン作用を模倣した内服可能な低分子物質の作成のための研究を行なっているところです。

　３.　子宮内膜症に関する研究　　　

　(子宮内膜症の発症メカニズムの解明、および本疾患に有用な腫瘍マーカーである CA125 の分子構造解析に成功した)

　CA125 は卵巣癌の腫瘍マーカーとして開発されたものであるが、卵巣癌細胞のみならず子宮内膜症組織、特に異所子宮内膜腺管上皮細胞からも大量に産生されることが判明した。卵巣癌細胞および異所子宮内膜腺管上皮細胞培養上清から CA125 を精製した結果、卵巣癌細胞由来 CA125 と異所子宮内膜腺管上皮細胞由来 CA125 はその分子量に差があり、 110 kDa の分子量を持つ CA125 は異所子宮内膜腺管上皮細胞にのみ認められた。この差を利用することにより卵巣癌と子宮内膜症の鑑別が可能になった。　　

・子宮腺筋症の５症例における異所内膜腺管上皮の電顕像 ―殊に増殖期内膜及び高分化型内膜腺癌との比較に関連して―：早田隆, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　37(6)：879-887， 1985

・子宮内膜症の保存療法：川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　38：1243-1249, 1986

・子宮腺筋症における異所性内膜腺管上皮のエストロゲン%レセプター染色：早田隆, 川島吉良　　産科と婦人科　53：347-351， 1986

・子宮内膜症 (とくに腺筋症) におけるコラーゲン成分の分析：早田隆, 川島吉良, 堀内健太郎, 藤本大三郎　　医学のあゆみ　137：639-640， 1986

・Fulminant hepatic failure associated with aplastic anemia after treatment with Danazol. Case report ： Nakajima T., Mizushima N., Matsuda H., Matsumoto M., Tamakoshi K., Ishii H., Morioka S., Ikeda Y., Terao T. Br. J. Obstet. Gynecol.　93：1013-1015， 1986

・Clinicopathologic study of eight cases of uterine body cancers associated with endometriosis interna (uterine adenomyosis) ： Hayata T., Kawashima Y.　　Am. J. Obstet. Gynecol.　156：663-666， 1987

・子宮内膜症における血中ＣＡ１２５上昇機序に関する臨床的考察：小林浩, 三宅若葉, 山下美和, 金山尚裕, 早田隆, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　40(4)：467-472， 1988

・正所および異所子宮内膜腺管上皮培養細胞からのＣＡ１２５産生に関する基礎的検討：小林浩, 井田若葉, 寺尾俊彦, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　44(3)：303-309， 1992

・Molecular characterization of the CA125 antigen produced by human endometrial epithelial cells: Comparison between eutopic and heterotopic epithelial cells. ： Kobayashi H., Ida W., Terao T.　　Am. J. Obstet. Gynecol.　169：725-730， 1993

４.　絨毛性腫瘍に関する研究　　　

　(県下における絨毛癌患者の登録とその治療法を確立した)

　県下の絨毛癌患者の新発生を登録することにより疾患の推移およびその治療の妥当性が確認された。また、絨毛癌細胞が浸潤、転移するメカニズムを解明するために基礎実験を行っている。その結果、細胞表面のウロキナーゼやプラスミンにより細胞外基質の破壊がおこり、浸潤、転移することが確認され、これらの酵素を抑制することにより絨毛癌細胞の浸潤、転移を抑制することが in vitro および in vivo 実験により証明された。臨床応用可能な薬剤の combination chemotherapy の開発も行っている。　　

・Registry and follow-up systems of trophoblastic disease in Japan ： Kawashima Y., Maeda M., Fujii T.　　Seminars in Surgical Oncology　1：84-94， 1985

・絨毛癌患者Ｔリンパ球の自家癌培養細胞に対する細胞障害能－夫リンパ球による誘導－：前田真，藤井俊朗，寺尾俊彦　日本産科婦人科学会雑誌　39：256-262， 1987

・絨毛癌転移病巣に対する手術療法：杉村基, 前田真, 川島吉良　日本産科婦人科学会雑誌　40：747-753， 1988

・Serine Protease Inhibitor, Aprotinin, Efficiently Inhibits Destruction of Bovine Vascular Endothelial Cells by Choriocarcinoma Cells ： Sugimura M., Kobayashi H., Terao T.　　Gynecol. Oncol.　52：337-346， 1994　

５.　悪性腫瘍の転移とその制御に関する研究　　　

　(癌の浸潤、転移のメカニズムの解明と悪性腫瘍の治療に大きく寄与した)

　子宮癌、卵巣癌のみならず各種の培養癌細胞を使用して癌細胞が浸潤、転移するメカニズムを in vitro および in vivo の実験系で検討した。癌細胞は酵素学的に不活性型のウロキナーゼを産生し、これが細胞表面に存在するカテプシン B により活性型のウロキナーゼに変換される。さらにこのウロキナーゼによりプラスミノーゲンがプラスミンに変換され、直接に、あるいはコラゲナーゼを活性化することにより間接的に細胞外マトリックスや基底膜を破壊し、癌細胞が浸潤していく機構が詳細に解明された。従って、このカスケードのいずれかをブロックすることにより癌細胞の浸潤、転移が抑制されることが考えられる。そこで、羊水から精製した protease inhibitors の中に癌細胞の浸潤、転移を強く抑制する物質があることを発見し、この物質の構造を解析した結果ヒト尿中に存在する Urinary trypsin inhibitor (UTI)と同一物質であることが確認された。 In vitro の Boyden chamber を利用した invasion assay およびマウスを用いた in vivo 転移実験モデルにおいても UTI は非常に有効な薬剤であることが判明した。さらに UTI 分子内の転移抑制部位の解析によりさらに有効なペプチドの利用を検討している。　　

・Inactivation of human tumor cell pro-urokinase by granulocyte elastase ： Kanayma N., Terao T.　　Jpn. J. Cancer Res.　81：994-1002， 1990

・Cathepsin B efficiently activates the soluble and the tumor cell receptor-bound form of the proenzyme urokinase-type plasminogen activator (pro-uPA) ： Kobayashi H., Schmitt M., Goretzki L., Chucholowski N., Calvete J., Kramer M., Gu¨nzler W.A., Ja¨nicke F., Graeff H.　 J. Biol. Chem.266：5147-5152， 1991

・Durch fluss zytometrische DNA-analyse von reinen zellkernen aus formalin-fixierten paraffinschnitten beim primaren mammakarzinom ： Harbeck N., Moniwa N., Busch E., Schmitt M., Ja¨nicke F., Fellbaum C., Hofler H., Graeff H.　　Korrelation mit anderen prognosefaktoren. Gynakol. Rundsch.　31：299-302， 1991

・Cathepsin B efficiently activatets the soluble and the tumor cell receptor-bound form of the proenzyme urokinase-type plasminogen activator (pro-uPA) ： Kobayashi H., Kanayama N., Schmitt M., Goretzki L., Chucholowski N., Calvete J., Kramer M., Gu¨nzler W.A., Ja¨nicke F., Terao T., Graeff H.　　In: Takada A., Budzynski A.Z. eds., Hemostasis and Circulation Tokyo, Springer,　115-120， 1992

・Inhibition of in vitro ovarian cancer cell invasion by modulation of urokinase-type plasminogen activator and cathepsin B ： Kobayashi H., Ohi H., Sugimura M., Shinohara H., Fujii T., Terao T.　　Cancer Res.　52：3610-3614， 1992　

・Quantitative assessment of the receptor-binding domain within the urokinase-type plasminogen activator (uPA), with tumor cell receptors or monoclonal antibody GFD1 as the target ： Kobayashi H., Terao T., Schmitt M., Goretzki L., Chucholowski N., Calvete J., Gu¨nzler W.A., Ja¨nicke F., Graeff H.　　Cytometry Res.　2(2)：157-162， 1992

・Clinical Significance of Urokinase-Type Plasminogen Activator (uPA) in Invasive Cervical Cancer of the Uterus ： Sugimura M., Kobayashi H., Kanayama N., Terao T.　　Gynecol. Oncol.　46：330-336， 1992

・Ｕ９３７細胞膜結合性 single-chain urokinase-type plasminogen activator (pro-uPA) の plasmin による活性化：小林浩, 大井豪一, 篠原弘光, 杉村基, 寺尾俊彦　　日本血栓止血学会雑誌　4(3)：170-178， 1993

・Effects of membrane-associated cathepsin B on the activation of receptor-bound prourokinase and subsequent invasion of reconstituted basement membranes ： Kobayashi H., Moniwa N., Sugimura M., Shinohara H., Ohi H., Terao T.　　Biochim. Biophys. Acta.　1178：55-62， 1993

・Clinical evaluation of new cancer-associated antigen CA125 II in epithelial ovarian cancers: comparison with CA125 ： Kobayashi H., Tamura M., Satoh T., Terao T.　　Clin. Biochem.　26：213-219， 1993

・Increased cell-surface urokinase in advanced ovarian cancer ： Kobayashi H., Moniwa N., Sugimura M., Shinohara H., Ohi H., Terao T.　　Jpn. J. Cancer Res.　84：663-640， 1993

・Saturation of tumour cell surface receptors for urokinase-type plasminogen activator by amino-terminal fragment and subsequent effect on reconstituted basement membranes invasion ： Kobayashi H., Ohi H., Shinohara H., Sugimura M., Fujii T., Terao T., Schmitt M., Goretzki L., Chucholowski N., Ja¨nicke F., Graeff H.　　Br. J. Cancer　67：537-544， 1993

・子宮頚癌における urokinase-type plasminogen activator の局在とリンパ節転移との関係：藤城卓, 小林浩, 寺尾俊彦　　日本産科婦人科学会雑誌　46(2)：129-136， 1994

・Effects of urinary trypsin inhibitor on the invasion of reconstituted basement membranes by ovarian cancer cells　　Kobayashi H., Fujie M., Shinohara H., Ohi H., Sugimura M., Terao T.　　Int. J. Cancer　57：378-384， 1994

・Inhibition of the Soluble and the Tumor Cell Receptor-bound Plasmin by Urinary Trypsin Inhibitor and Subsequent Effects on Tumor Cell Invasion and Metastasis ： Kobayashi H., Shinohara H., Takeuchi K., Itoh M., Fujie M., Saitoh M., Terao T.　　Cancer Res.　54：844-849， 1994

・Role of Activated Protein C in Facilitating Basement Membrane Invasion by Tumor Cells ： Kobayashi H., Moniwa N., Gotoh J., Sugimura M., Terao T.　　Cancer Res.　54：261-267， 1994

・Impact of Urokinase-Type Plasminogen Activator and Inhibitor Type １on Prognosis in Cervical Cancer of the Uterus ： Kobayashi H., Fujishiro S., Terao T.　　Cancer Res.　54：6539-6548， 1994

・Urinary trypsin inhibitor (ＵＴＩ) and fragments derived from ＵＴＩ by 　 limited proteolysis efficiently inhibit tumor cell invasion ： Kobayashi H., Shinohara H., Ohi H., Sugimura M., Terao T., Fujie M.　　Clin. Exp. Metastasis　12：117-128, 1994

・Characterization of the Cellular Binding Site for the Urinary Trypsin Inhibitor ： Kobayashi H., Gotoh J., Fujie M., Terao T.　　J. Biol. Chem.

269(32)：20642-20647， 1994

・Urinary trypsin inhibitor (UTI)による癌細胞浸潤、転移の抑制：小林浩, 寺尾俊彦　　第一回血液アゴラ　91-98， 1994

・Isolation and characterization of anti-metastatic factor from human amniotic fluid ： Kobayashi H., Terao T Chiba Int. Symp. Cancer 117-120, 1994

・Inhibition of the metastasis of Lewis lung carcinoma by antibody against urokinase-type plasminogen activator in the experimental and spontaneous metastasis model ： Kobayashi H., Gotoh J., Shinohara H., Moniwa N., Terao T. 　 Thromb. Haemost. 71(4)：474-480， 1994

・Inhibitory effect of a conjugate between human urokinase and urinary trypsin inhibitor on tumor cell invasion in vitro ： Kobayashi H., Gotoh J., Hirashima Y., Fujie M., Sugino D., Terao T.　　J. Biol. Chem.　270(14)：8361-8366， 1995

・Urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (CD87): a new target in tumor invasion and metastasis ： Schmitt M., Wilhelm O., Ja¨nicke F., Magdolen V., Reuning U., Ohi H., Moniwa N., Kobayashi H., Weidle U., Graeff H.　　J. Obstet. Gynaecol.　21(2)：151-165， 1995

６.　悪性腫瘍の診断と治療法の改善　

　a. 腫瘍マーカーに関する研究　　　

　(腫瘍マーカー CA125 の研究に関して日本のトップクラスの仕事である)

　卵巣癌の腫瘍マーカーを主に研究しており、 CA125, CA130, CA602 および糖鎖母核構造を認識する Sialyl Tn, CA54／61, CA72-4 の構造解析、臨床応用について研究してきた。これらの腫瘍マーカー値と患者の予後について臨床的解析を加え、癌化学療法剤の選択等に関し実地臨床に応用している。さらに卵巣癌患者を早期に発見するために腫瘍マーカーを利用した卵巣癌検診を昭和６０年から静岡県下で実施し、１０年が経過したところであり、現在受検者数は約８万例を数えるに至った。詳細は卵巣癌検診の項目を参照されたい。　

・婦人科疾患における Sialyl ＳＳＥＡ-１測定の臨床的有用性－特にＣＡ１２５との関連について－：小林浩　　日本産科婦人科学会雑誌　40：828-834， 1988

・卵巣癌患者経過観察における血清 Sialyl Lex-i 値測定の有用性：小林浩　　日本産科婦人科学会雑誌　41：15-19， 1989

・組織培養実験による子宮内膜のＣＡ１２５産生能に関する研究－正所内膜および異所内膜における比較－：小林浩　　日本産科婦人科学会雑誌　41：143-148， 1989

・腹水中ＣＡ１２５抗原の由来および血中への移行動態に関する基礎的%臨床的検討：小林浩　　日本産科婦人科学会雑誌　41：390-396， 1989

・腫瘍マ－カ－を利用した卵巣癌患者の血清学的診断－診断効率の面から－：小林浩, 住本和博, 寺尾俊彦, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　41(10)：1501-1506， 1989

・ＣＡ１２５, ＳＬＸおよびＣＡ７２-４による卵巣癌患者の判別：小林浩, 　川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　41：1731-1735， 1989

・腫瘍マ－カ－の数学的手法 (因子分析および多重判別関数式) による卵巣癌患者の血清学的診断：小林浩, 住本和博, 寺尾俊彦, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　41(12)：1903-1910， 1989

・卵巣癌におけるＣＡ72-4 の臨床的有用性：小林浩　　医学のあゆみ　148：63-64， 1989

・子宮内膜培養細胞におけるＣＡ１２５産生動態に関する研究－正所内膜と異所内膜の比較－：井田若葉, 小林浩, 内藤恭久　　日本産科婦人科学会雑誌　42(9)：1161-1167, 1990

・Clinical usefulness of serum Sialyl SSEA-1 antigen levels in patients with epithelial ovarian cancer ： Kobayahi H., Kawashima Y.　　Gynecol. Oncol.　30：52-58， 1990

・卵巣癌腫瘍マーカーとしてのＤ-dimer 測定の意義：金山尚裕　　日本産科婦人科学会雑誌　43：485-488， 1991

・Clinical evaluation of circulating serum Sialyl Tn antigen levels in patients with epithelial. ovarian cancer ： Kobayashi H., Terao T., Kawashima Y.

J. Clin. Oncol.　9：983-987， 1991

・卵巣癌患者における予後因子としての血清 Sialyl Tn 値測定の有用性：小林浩, 寺尾俊彦, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　44(1)：14-20， 1992

・異所子宮内膜腺管培養細胞と卵巣癌培養細胞より分泌される CA 125 の分子 heterogeneity に関する研究：小林浩, 井田若葉, 藤井俊朗, 寺尾俊彦, 川島吉良　日本産科婦人科学会雑誌　44(5)：571-576， 1992

・Serum Sialyl Tn as an independent predictor of poor prognosis in patients with epithelial ovarian cancer ： Kobayashi H., Terao T., Kawashima Y.　　J. Clin. Oncol.　10(1)：95-101， 1992

・Sialyl Tn as a prognostic marker in epithelial ovarian cancer ： Kobayashi H., Terao T., Kawashima Y.　　Br. J. Cancer　66：984-985， 1992

・Characterization and clinical evaluation of tumor-associated antigen CA54／61 identified by monoclonal antibodies MA54 and MA61 inepithelial ovarian cancer ： Kobayashi H., Ohi H., Sugimura M., Shinohara H., Terao T.　　Gynecol. Oncol.　47　328-336， 1992　

・CA 125 分子の heterogeneity －CA 125 分子は Sialyl Tn, CA 19-9 と複合体を形成する－：小林浩, 大井豪一, 篠原弘光, 寺尾俊彦　　日本産科婦人科学会雑誌　45(9)：980-986， 1993

・Quantitative and qualitative assessment of CA-125 production by human endometrial epithelial cells: comparison of eutopic and heterotopic epithelia lcells ： Kobayashi H., Ida W., Terao T., Kawashima Y.　　Int. J. Cancer　54：426-434， 1993

・Characterization and clinical usefulness of CA130 antigen recognized by monoclonal antibodies, 130-22 and 145-9, in ovarian cancers ： Kobayashi H., Ohi H., Fujii T., Terao T.　　Br. J. Cancer　67：237-243， 1993

・Molecular characteristics of the CA 125 antigen produced by human endometrial epithelial cells: comparison between eutopic and heterotopic epithelial cells ： Kobayashi H., Ida W., Terao T., Kawashima Y.　　Am. J. Obstet. Gynecol.　169(3)：725-730， 1993

・Biochemical markers as a predictor for lymphnode involvement in patients with cervical cancer of the uterus ： Kobayashi H., Fujishiro S., Terao T.　　Int. J. Oncol. 4：1053-1059， 1994

・卵巣癌検診の現状と将来：小林浩　　産科と婦人科　62：887-893， 1995　

・Clinical evaluation of squamous cell carcinoma antigen in squamous cell carcinoma arising in mature cystic teratoma of the ovary ： Suzuki M., Kobayashi H., Sekiguchi I., Konnai K., Terao T., Sato I.　　Oncol.　52：287-290， 1995

b. 制癌剤感受性試験　　　

　(臨床に応用可能な簡便な制癌剤感受性試験を開発した)

　クリスタルヴィオレット取り込みという簡易検査であり、実際に臨床の場で役立てようとしている。数ある制癌剤感受性試験のなかで本法は臨床医向けの検査と言える。

・クリスタルヴィオレット取り込みを指標とした簡便な制癌剤感受性試験：藤井俊朗, 前田真, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　39：352-358， 1987

c. 化学療法副作用対策　　　　

　(化学療法に対する副作用軽減と患者の QOL 向上のために基礎的、臨床的研究を行った。特にシスプラチンによる腎毒性を軽減するための新しい薬剤を開発し、全国治験を行い、有効性と安全性が確認された)

　卵巣癌患者に対する化学療法はシスプラチンの登場により治療成績が向上した。しかし、シスプラチンには腎障害という不可逆的な副作用があるため、投与には慎重でなければならない。われわれは家兎を用いてシスプラチンの腎障害の発生メカニズムを解明した結果、腎臓の近位尿細管細胞のライソゾーム膜破壊が原因であり、二次的に細胞の破壊、壊死を引き起こすことを確認した。そこでこのライソゾーム膜破壊を防ぐため、 protease inhibitor である UTI を使用すると、完全に腎障害が抑制されることが家兎実験にて確認された。この結果を踏まえて全国で治験 (第３相臨床治験) が終了し有効性と安全性に関して結論が得られ、 UTI がシスプラチンの腎毒性を抑制することが確認された。将来の臨床応用により患者の QOL 向上に大きく寄与するものと思われる。　　

・ＰＡＣ療法における消化器症状に対する metoclopramide, dexamethasone,antihistamine ３剤併用の効果：小林浩　　日本産科婦人科学会雑誌　40：153-159， 1988

・卵巣癌に対する多剤併用化学療法 (ＰＡＣ療法) の検討：小林浩, 前田真, 早田隆, 川島吉良　　日本癌治療学会雑誌　23：829-836， 1988

・進行卵巣癌における予後推定スコアー作成の試み：小林浩, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　41：1783-1790， 1989

・進行卵巣癌に対する周期的 Cisplatin, Adriamycin, Cyclophosphamide 併用化学療法 (Cyclic PAC 療法) の検討：小林浩, 早田隆, 寺尾俊彦, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　41(12)：1936-1942， 1989

・Cisplatin 腎障害に対する urinastatin の予防効果－臨床面における検討－：小林浩, 石塚英司, 平嶋泰之, 大井豪一, 出向洋人, 茂庭将彦, 前田真, 小林隆夫, 寺尾俊彦, 川島吉良　　日本産科婦人科学会雑誌　41(12)：1959-1964， 1989

・Prevention by urinastatin of Cis-diamminedichloroplatinum-induced nephrotoxicity in rabbits. Comparison of urinary enzyme excretions and morphological alterations by electron microscopy ： Kobayashi H., Ohi H., Terao T.　　Asia-Oseania J. Obstet. Gynecol.　17：277-288， 1991

d. 子宮癌　　

　(子宮癌の疫学調査で子宮体癌患者家系に大腸癌患者の集積が多いことを発見した)

　子宮頚癌、子宮体癌の疫学調査を行った結果、子宮体癌患者家系には大腸癌患者の集積が多いことが発見された。この大腸癌には FAP と HNPCC の家系が発見されたが、子宮体癌家系には HNPCC の合併が多いように思われ、現在、遺伝子解析により結果を集積しているところである。平成７年に家族性腫瘍研究会が発足し、婦人科領域では浜松医大が担当することになった。これにより遺伝性腫瘍患者の家系が登録され、必要な情報が科を越えて交換出来るようになり、将来の遺伝子解析に威力を発揮するようになる。　　

・子宮体癌患者家系における大腸癌スクリ－ニング：小林浩，寺尾俊彦，川島吉良

癌の臨床　34：990-992， 1988

・子宮体癌の高危険因子および背景因子に関する調査：小林浩　　日本癌治療学会雑誌　23：1651-1659， 1988

・子宮頚癌管理におけるＣＴの有用性：小林浩　　日本癌治療学会雑誌　23：2679-2686， 1988

・Etoposide 内服薬が奏効した再発子宮頚癌の１例：小林浩, 川島吉良　　癌と化学療法　16：3279-3282， 1989

・Flow cytometry によるＤＮＡ解析による体癌の管理：寺尾俊彦, 杉村基, 茂庭將彦　　産科と婦人科　58：346-349， 1990

・子宮頚部浸潤癌における Epidermal Growth Factor (EGF) 受容体発現の免疫組織学的検討：杉村基, 小林浩, 金山尚裕, 寺尾俊彦　　日本産科婦人科学会雑誌　44(6)：689-694， 1992